简介：目的：构建大鼠组蛋白去乙酰基转移酶（histonedeacetylase8，HDAC8）基因过表达的慢病毒载体，转染大鼠骨髓基质细胞（bonemarrowstromalcells，BMSCs）后观察HDAC8的表达。方法：采用DNA重组技术将HDAC8基因插入到慢病毒表达载体质粒pGC-FU中，重组获得慢病毒载体pGC—FU—HDAC8。重组慢病毒载体经过测序鉴定后，转染293T细胞生产病毒液，用得到的病毒液转染大鼠BMSCs，实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分析转染前后HDAC8表达情况。结果：测序结果证实HDAC8基因正确插入载体中，成功构建大鼠HDAC8基因过表达载体。大鼠BMSCs转染后HDAC8mRNA及蛋白表达显著上调。结论：针对大鼠HDAC8基因过表达慢病毒载体构建成功，并能有效增强BMSCs中HDAC8基因的表达。

简介：摘要目的探究环状RNA hsa_circ_0007291(circSCAP)对肺腺癌恶性生物学行为的影响。方法从数据库获取circSCAP的线性序列，通过在线性序列两端加入Alu元件的方式构建circSCAP的过表达质粒，转染过表达circSCAP的质粒于A549细胞中，通过克隆形成实验与小室实验评估过表达circSCAP对肺腺癌细胞功能的影响。通过MS2 RNA下拉实验与质谱技术结合，寻找能够与circSCAP结合的蛋白，并对这些蛋白进行通路富集分析。采用t检验分析两组差异。结果构建质粒可成功上调circSCAP的表达。克隆形成实验结果表明，与对照组比较[(186.7±15.3)克隆/孔]，过表达circSCAP可提高A549细胞的克隆形成能力[(771.0±46.2)克隆/孔，t＝20.810，P<0.01]；而小室实验结果也提示，与对照组比较[(45.0±7.5)个/视野]，过表达circSCAP可提高A549细胞的侵袭能力[(73.0±6.0)个/视野，t＝5.000，P<0.01]。通过MS2 RNA下拉实验与质谱检测，可见17个可与circSCAP结合的蛋白，通路分析发现这些蛋白显著富集在氨基酸生物合成与细胞外基质受体相互作用通路中。结论过表达环状RNA circSCAP可以促进肺腺癌细胞的增殖与侵袭能力，circSCAP可能与蛋白结合发挥生物学功能。

简介：摘要目的分析长链非编码RNA(lncRNA)ATG16L2-211在肺腺癌组织和细胞株中的表达，研究其对肺腺癌细胞生长和迁移的影响及其分子机制。方法本研究为实验室研究。GEPIA在线数据库分析ATG16L2-211在肺腺癌组织中的表达情况。采用实时定量聚合酶链式反应检测ATG16L2-211在肺腺癌细胞株(H1650、A549、H1975、H1299)中的表达情况。将ATG16L2-211序列和阴性对照序列转入H1650细胞，分别标记为ATG16L2-211组和阴性对照组。CCK-8法检测H1650细胞活力，细胞划痕实验检测H1650细胞迁移。GEPIA在线数据库分析ATG16L2-211相关性较高的基因。实时定量聚合酶链式反应和Western blot检测ATG16L2-211相关基因的表达。结果ATG16L2-211在肺腺癌组织中表达低于正常组织(t＝48.12，P<0.001)。ATG16L2-211在肺腺癌细胞株中表达均低于正常肺泡上皮细胞(P值均<0.05)，H1650细胞中ATG16L2-211表达最低(F＝13.79，P<0.001)。与阴性对照组比较，从2 d开始至5 d ATG16L2-211组H1650细胞增殖活力均降低(P值均<0.05)。阴性对照组和ATG16L2-211组划痕愈合率为(72.15±6.23)%和(21.54±4.08)%，ATG16L2-211组H1650细胞迁移能力降低(t＝6.79，P＝0.001)。肺腺癌组织中ATG16L2-211和GAS6-AS1表达呈显著正相关(r＝0.60，P<0.001)。与阴性对照组比较，ATG16L2-211组H1650细胞中GAS6-AS1表达增加(t＝3.37，P＝0.015)，葡萄糖转运蛋白1基因表达降低(t＝4.33，P＝0.005)，转化生长因子β1信号通路蛋白表达降低。结论ATG16L2-211在肺腺癌组织及细胞株中低表达，上调ATG16L2-211能通过促进GAS6-AS1表达发挥抑制肺腺癌细胞生长和迁移的作用。

简介：摘要目的探讨miR-125在鼻咽癌组织中的表达及其调控肿瘤细胞生物学特性的可能机制。方法收集2018年6月至2019年6月上海交通大学附属第六人民医院南院收治的鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织各30例，通过荧光定量PCR法检测miR-125和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)mRNA的表达。鼻咽癌细胞CNE-2转染miR-125 mimic(miR-125 mimic组)，并设阴性对照组(NC组)。Transwell小室实验检测细胞侵袭能力；划痕愈合实验检测细胞迁移能力；WST-1用于评估细胞的增殖活力；流式细胞术和电镜观察分别用于检测细胞的凋亡和自噬；双荧光素酶报告分析miR-125靶标；Western blotting检测相关蛋白的表达情况。结果鼻咽癌组织中miR-125 mRNA的相对表达量为0.692±0.316，明显低于癌旁组织的1.501±0.748(t＝5.242，P<0.001)；鼻咽癌组织中FGF-2 mRNA的相对表达量为1.317±0.552，明显高于癌旁组织的0.783±0.241(t＝7.360，P<0.001)。miR-125 mimic组CNE-2细胞中miR-125 mRNA的表达量为4.091±0.145，显著高于NC组的0.993±0.137(t＝85.062，P<0.001)。miR-125 mimic组完成转染48、96 h后，CNE-2细胞的增殖活性均显著低于NC组(0.891±0.214 vs. 1.295±0.245，t＝6.802，P<0.001；0.934±0.208 vs. 1.488±0.269，t＝8.924，P<0.001)。miR-125 mimic组的穿膜细胞数和细胞的迁移率分别为(36 000±3 820)个和(39.4±6.5)%，均显著低于NC组的(74 000±7 500)个和(102.7±10.6)%(t＝24.728，P<0.001；t＝27.883，P<0.001)。miR-125 mimic组CNE-2细胞凋亡率为(22.5±1.4)%，显著高于NC组的(1.4±0.5)%(t＝77.740，P<0.001)，且miR-125 mimic组细胞凋亡蛋白Bax的相对表达量为0.983±0.158，显著高于NC组的0.418±0.122(t＝15.503，P<0.001)，Bcl-2的相对表达量为0.688±0.174，显著低于NC组的1.013±0.109(t＝8.670，P<0.001)。电镜观察到miR-125过表达的CNE-2细胞出现自噬现象，miR-125 mimic组自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量比值为2.517±0.209，显著高于NC组的1.238±0.135(t＝28.156，P<0.001)。miR-125 mimic组FGF-2蛋白的表达量为0.504±0.118，显著低于NC组的1.228±0.134(t＝22.210，P<0.001)。双荧光素酶报告证实FGF-2是miR-125的靶基因。FGF-2基因质粒和miR-125 mimic共转染的CNE-2细胞完成转染12、24、48及96 h细胞增殖活性均显著高于miR-125 mimic转染细胞(均P<0.05)，细胞凋亡率显著低于miR-125 mimic转染细胞[(6.2±1.5)% vs. (17.6±2.4)%，t＝22.062，P<0.001]。结论miR-125在鼻咽癌组织中表达下降，过表达miR-125可能通过下调FGF-2抑制鼻咽癌细胞CNE-2的增殖、迁移和侵袭，促进CNE-2的凋亡与自噬。

简介：摘要目的探讨驱动蛋白家族成员20A（KIF20A）在人表皮生长因子受体2（HER2）过表达型乳腺癌中的表达和临床意义。方法回顾性分析82例HER2过表达型乳腺癌病例的临床病理特征资料。用免疫组织化学的方法检测组织中KIF20A的表达，分析HER2过表达型乳腺癌中KIF20A的表达及与临床病理特征的关系。通过生物信息学的方法分析KIF20A在HER2过表达型乳腺癌组织及癌旁正常组织中的mRNA水平，并分析其表达与患者的生存率间的关系。结果KIF20A的阳性表达在胞核，成棕黄色颗粒。在HER2过表达型乳腺癌组织中，KIF20A阳性高表达率为57.3%，而在癌旁组织中主要是低表达或无表达。KIF20A高表达与肿瘤大小和pTNM分期显著相关，而与年龄和肿瘤分级的相关性无统计学意义。生物信息学分析结果提示侵袭性乳腺癌中KIF20A高表达与不良的无疾病生存期显著相关。结论KIF20A在HER2过表达型乳腺癌中存在异常表达，与HER2过表达型乳腺癌肿瘤分级和pTNM分期相关，并且KIF20A高表达提示预后不良。

简介：目的：构建大鼠特殊富含AT序列结合蛋白2（specialAT-richbindingprotein2,Satb2）基因过表达的慢病毒载体,转染大鼠骨髓基质细胞（bonemarrowstromalcells,BMSCs）后观察Satb2的表达。方法：采用DNA重组技术将Satb2基因插入到含有绿色荧光蛋白（GFP）基因的慢病毒表达载体质粒GV208中,获得重组慢病毒载体GV208-Satb2。重组慢病毒载体经过测序鉴定后转染293T细胞生产病毒液,用得到的病毒液转染大鼠BMSCs,Westernblot分析转染前后Satb2表达情况。结果：测序结果证实Satb2基因正确插入载体中,成功构建大鼠Satb2基因过表达载体。Westernblot检测显示转染后Satb2蛋白表达显著上调。结论：针对大鼠Satb2基因过表达慢病毒载体构建成功,并能有效增强BMSCs中Satb2基因的表达。

简介：目的构建arhgap39基因真核过表达载体并初步研究arhgap39蛋白表达的相关问题。方法提取小鼠海马组织总RNA，逆转录合成cDNA，根据GeneBank中基因信息设计引物，高保真PCR扩增arhgap39基因的编码区，随后将其转移到真核载体上，转染NG-108细胞并观察其在细胞内的表达情况。结果经酶切和测序鉴定表明成功构建arhgap39基因的相关真核过表达载体；将其转染NG-108细胞，免疫印迹试验证实arhgap39成功过表达，arhgap39的分子量约为140kD。结论我们的实验结果确认了arhgap39蛋白的分子量，并对其可能存在的存在形式做了验证性研究，可以为进一步的研究提供理论基础和研究工具。

简介：摘要目的探讨过表达三基序蛋白27（tripartite motif-containing, TRIM27）对小鼠重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）的保护作用及其可能机制。方法24只小鼠按随机数字表法分为假手术+对照病毒组（AAV-GFP组）、假手术+过表达TRIM27组（AAV-TRIM27组）、SAP+对照病毒组（SAP+AAV-GFP组）、急性+过表达TRIM27组（SAP+AAV-TRIM27组），每组各6只。腹腔注射L-精氨酸（4 mg/kg）制作小鼠SAP模型，假手术组注射等体积生理盐水，病毒组通过腹腔注射对照或者TRIM27过表达腺相关病毒（2×1011 μg/只）。各组小鼠建模后72 h处死收集血清及胰腺组织标本，通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α, TNF-α）、白介素1b（interleukin-1b, IL-1b）、IL-6、人巨噬细胞趋化蛋白-1（macrophage chemoattractant protein-1, MCP-1）以及胰腺组织中丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽（glutathione, GSH）等表达，通过苏木精-伊红染色观察胰腺组织病理损伤，通过免疫组化观察小鼠胰腺组织中髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）、Ly6g阳性炎症细胞表达，通过蛋白免疫印迹试验测定胰腺组织中p-p65、p65、p-ASK1、ASK1、p-JNK、JNK、p-p38、p38等蛋白表达。结果小鼠SAP后胰腺组织中TRIM27表达显著下调（P<0.05）；通过腺相关病毒过表达TRIM27后，小鼠胰腺组织中TRIM27表达显著上调（P<0.05）。AAV-GFP组与AAV-TRIM27组小鼠各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。与SAP+AAV-GFP组相比，SAP+AAV-TRIM27组小鼠血清淀粉酶、脂肪酶以及TNF-α、IL-1b、IL-6、MCP-1水平显著降低，胰腺组织中MDA降低、SOD和GSH升高，MPO、Ly6g等炎症细胞表达显著减少，同时p-p65、p-ASK1、p-JNK、p-p38等蛋白表达显著下调（P<0.05）。结论TRIM27过表达能够通过抑制炎症反应和氧化应激减轻小鼠急性，其机制可能是通过抑制NFκB/MAPK信号通路。

简介：摘要目的构建并包装大鼠Six2基因过表达慢病毒及建立稳定过表达Six2基因的MES23.5细胞株。方法采用RT-PCR方法扩增Six2基因片段并将其连接于含有嘌呤霉素抗性的pLV-CS2.0-N-HA载体质粒，采用慢病毒包装四质粒系统（pRRE/pVSVG/pREV/pLV），用转染试剂Lipofectamine2000将四质粒按一定比例转染293T细胞；收集慢病毒上清并感染MES23.5细胞株，嘌呤霉素筛选稳定表达Six2的MES23.5细胞株，Westernblotting检测Six2蛋白的表达。结果限制性内切酶酶切结果表明在900bp处有一明显条带;Six2测序结果显示序列与genebank上的序列完全一致；嘌呤霉素筛选病毒感染的MES23.5细胞，传代筛选第5代后细胞几乎无死亡现象；Westernblotting结果显示，在分子量为23.4kDa处有相应条带。结论成功构建过表达Six2基因的慢病毒表达载体；得到了较高滴度的病毒悬液；建成稳定表达Six2基因的MES23.5细胞株，此研究为进一步探讨Six2基因的功能提供了良好的研究工具。

简介：目的：Gankyrin作为一个新的癌基因,在细胞周期调控和肿瘤发生过程中有重要功能。建立Gankyrin过表达的细胞和动物模型,以便进一步研究其在肿瘤形成过程中的作用机制。方法：采用逆转录病毒感染细胞的方法构建Gankyrin稳定表达的细胞株,采用Western-blot检测Gankyrin的表达,采用软琼脂和裸鼠成瘤实验验证该细胞株的恶性转化效应。结果：构建了Gankyrin稳定过表达的NIH3T3细胞株,且该细胞株具有成瘤性。结论：采用逆转录病毒感染细胞的方法可以有效建立Gankyrin转化细胞株,为进一步研究Gankyrin的作用机制及其在肿瘤形成中的功能提供了基础。

简介：摘要目的构建Nurr1腺病毒表达载体。方法设计带有酶切位点的Nurr1引物，采用PCR法从Nurr1基因载体中扩增目的基因，经限制性酶切后与pHBAd-EF1-MCS-GFP连接，转化感受态细胞。验证后，与骨架质粒pHBAd-BHG共同转染293细胞，通过反复冻融传代提高病毒载体滴度。结果成功构建具有目的基因NURR1的过表达腺病毒载体。

简介：基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础，RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术，该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法，构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA干扰Gateway载体pAHC．PSK—RNAi、pClean—G185．RNAi和过表达Gateway载体pAHC．PSK—OE和pClean—G185一OE，为利用基因枪和农杆菌介导的遗传转化，在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。

简介：木薯是世界第三大薯类作物,所产淀粉广泛用作食品和工业原料,是重要的粮食和经济作物。木薯蔗糖合酶是将光合同化物蔗糖向淀粉转化的第一个关键酶,前期本课题组通过酵母单杂交分析发现αNAC可能是木薯蔗糖合酶Ⅰ基因的调控因子,本研究在此基础上获得了αNAC基因转录序列并克隆其编码序列,发现编码蛋白具有典型的NAC和UBA保守结构域。αNAC基因在木薯地上部叶和地下部块根肉中转录活性较高,为β-actin基因的5%~25%,在施用外源激素条件下转录活性显著上调,其中茉莉酸达到峰值时间最短,水杨酸次之,乙烯、脱落酸、赤霉素和生长素较长。此外,在MeSuSy1Promoter::GUS的转化株中二次过表达αNAC基因,发现二次转化株中GUS酶活显著低于单价转化株,表明过表达αNAC基因可以显著抑制木薯蔗糖合酶Ⅰ基因的转录活性。

简介：

简介：摘要肾素-血管紧张素系统(RAS)由一系列酶、激素及其受体组成，在动脉粥样硬化（AS）发生发展过程中起重要作用。肾素（Renin）可特异性催化血管紧张素原转化为血管紧张素I，后者再转化为血管紧张素II（AII），从而激活RAS。RAS的激活可导致血管内皮功能减退，炎症反应加剧，AS斑块不稳定，促进AS病变的演进发展。Renin作为AII上游的RAS成员，在心脑血管遗传学研究中越来越受到重视，因此本实验在前期构建了人Renin基因腺相关病毒表达载体的基础上，通过体外细胞实验，进一步探究Renin基因高表达对AS中RAS系统及相关炎症因子表达的影响，为AS的治疗提供新的靶标和思路。

简介：稻瘟病菌基因组测序的完成有助于全新效应蛋白的挖掘和功能鉴定,而未知功能的蛋白生物信息学预测为这些蛋白的生物学功能鉴定提供了重要的理论参考。本研究利用生物信息学分析对蛋白理化性质分析及其二级结构等进行预测,并构建这四个基因与绿色荧光蛋白（GFP）融合的过表达载体。从稻瘟病数据库中下载MoS4、MoS74、MoS997、MoS1460基因序列,通过分析得到MoS4、MoS74、MoS997和MoS1460基因的ORF分别为281bp、251bp、267bp和240bp;预测MoS997蛋白属于稳定性较好的亲水蛋白,MoS4、MoS74属于不稳定的疏水蛋白,且MoS74还是一个跨膜蛋白,而MoS1460蛋白则属于不稳定的亲水性蛋白,并且获得了四个基因与绿色荧光蛋白（GFP）融合的过表达载体,并经过测序验证。研究结果为进一步探究稻瘟病菌效应蛋白基因的功能及亚细胞定位等提供科学依据。

简介：目的：研究B细胞淋巴瘤因子6共抑制因子（BCL6co—repressor，BCOR）对根尖牙乳头干细胞成肌分化能力的影响。方法：利用HA—BCOR逆转录病毒载体过表达BCOR进行获得性功能研究；WesternBlot检测HA—BCOR的过表达效果；重组人肿瘤生长因子β1（TGF—β1）蛋白诱导根尖牙乳头干细胞体外成肌分化；通过检测成肌分化相关基因smoothened（SMO）、smoothmuscleactinalpha2（ACTA2）和caldeson（CALDl）的表达研究根尖牙乳头干细胞体外成肌分化能力。结果：WesternBlot结果显示HA-BCOR可以在根尖牙乳头干细胞有效的过表达；过表达BCOR抑制根尖牙乳头干细胞成肌分化相关基因SMO和CALDl的表达。结论：过表达BCOR基因抑制根尖牙乳头干细胞体外成肌分化，证实BCOR是根尖牙乳头干细胞成肌分化的抑制甚因。

简介：时下,在对国家公务员的评议中常听到一些言不符实的溢美之词,使本应实事求是、功过分明的评议活动走调变味.某单位领导在执行公务中索拿卡要,造成严重不良影响,竟也堂而皇之地戴上了“优秀”的桂冠.由此想起《司马徽别传》中“有以人物问徽者,初不辨高下,每辄言佳”的描述.而今之“好好先生”,不论“初不辨”还是“久已辨”,皆“每辄言佳”,可谓比古之“好好先生”更胜一筹.不言人过者的用心在于培植“义气之情”,排除是非之险.若是为政者,如此会捞来选票,得以“仕途高升”;若是平民辈,不言人过则可避免惹祸招灾.

简介：小文是一个电脑迷，经常购买订阅各种电脑杂志，电脑光盘也攒了一大堆，烦恼也随之而来，他经常要从光盘里查找一些软件教程，可光盘太多了，有时候不知道在哪一个盘里只好把光盘一张张放入光驱查找，不仅浪费了时间，更重要的是小文心疼那心爱的光驱呀老是这样使用，说不定什么时候，光驱就会罢工的。

简介：目的：研究Pim-2基因异位过表达与肝细胞性肝癌的关系。方法：将转染Pim-2基因质粒（转染组）、对照空质粒（空质粒组）转染张氏肝细胞，并设未转染组，通过MTT实验、流式细胞仪检测、Millicell小室细胞迁移实验、RT-PCR、细胞免疫组织化学及裸鼠体内接种成瘤等方法检测肝细胞在体内外增殖的变化，应用光学显微镜和透射电镜（TEM）观察细胞形态。结果：（1）转染组细胞形态发生明显变化，细胞接种48、72、96、120h的平均OD值、细胞凋亡率、细胞迁移的平均细胞数与空质粒组相比差异有统计学意义（P〈0．05），而空质粒组与未转染组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）转染组细胞Pim-2mRNA表达明显高于空质粒组、未转染组；转染组细胞胞质、胞核均有Pim-2蛋白表达，空质粒组、未转染组表达转弱；（3）3组细胞接种裸鼠后，成瘤组织光学显微镜及TEM均见明确肿瘤细胞形态改变。结论：Pim-2基因能够诱导张氏肝细胞恶性转变，造成细胞在形态、生长、增殖、凋亡及迁移能力的改变。