简介:目的:探讨紫杉醇-壳寡糖缓释膜通过抑制TGFβ/Smad信号对良性胆管瘢痕纤维化产生抵抗作用的机制及其最佳作用因素。方法:提取新西兰大耳白兔的成纤维细胞进行体外培养分组,分别加入不同浓度的紫杉醇溶液,通过MTT法测定成纤维细胞的生长活性,IFCC测定α-SMA(即肌成纤维数量)荧光表达情况,PT-PCR和Westernblot法检测TGF-β1信号通路情况,来测定紫杉醇对成纤维细胞肌成纤维化的抵抗作用及其最佳抑制浓度和最佳抑制时间。并在以上基础上分析紫杉醇缓释膜的疗效。结果:紫杉醇可通过阻滞TGFβ/Smad信号通路进而抑制胆管瘢痕成纤维细胞向肌成纤维转化,其最佳浓度为0.06g/mL,最佳时间为48h;紫杉醇给药时,使用缓释膜释放比直接药物操作更加简便,效果更理想,更能减轻患者的痛苦(P〈0.05);紫杉醇-壳寡糖缓释膜抗良性胆管瘢痕纤维化的最佳载药量为9mg。结论:紫杉醇-壳寡糖能够通过抑制TGFβ-Smad信号通路对良性胆管瘢痕纤维化起到抵抗作用,为临床防治良性胆管瘢痕纤维化的研究提供了新的方向,具有较高的临床价值和研究意义。
简介:目的:建立实时定量RT—PCR检测人转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)的方法,对慢性肝炎肝纤维化患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)中TGF-β1mRNA进行定量检测。方法:在TGF-β1基因的外显子1和2之间设计一对引物和一条TaqMan—MGB探针;构建TGF-β1质粒克隆,以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA作为标准品,根据10倍系列稀释cRNA标准浓度对数和其循环域值(Cyclethreshold,Ct)制作标准曲线,检测PBMC中TGF—β1mRNA含量;并对本方法进行方法学评价。结果:重组质粒测序显示插入的片断为TGF—β1mRNA特异性片断,成功的建立了实时定量RT—PCR检测TGF-β1mRNA方法,灵敏度达6.81拷贝,线性范围为6.81~6.81×10^8拷贝,且重复性好,批内、批间变异系数分别为1.28%-2.27%和2.56%-2.61%,临床应用显示,27例肝纤维化病人PBMC中TGF-β1表达量为1.20×10^8(1.80×10^7~9.80×10^7)拷贝数/10^5细胞,显著高于正常对照组3.30×10^7(7.24×10^6~5.00×10^7)拷贝数/10^5细胞(P<0.05)。结论:实时定量RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有敏感、特异、快速、高效等特点,为TGF—β1mRNA作为肝纤维化的诊断指标提供方法学依据。
简介:摘要肾纤维化的主要特征为肾间质中成纤维细胞增生和细胞外基质的过量沉积,最终造成肾组织结构损伤及功能丧失。转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路是调节成纤维细胞和肌成纤维细胞胶原形成的典型途径。TGF-β1/Smad信号传导途径的持续激活导致成纤维细胞和肌成纤维细胞长期过度活化,对于肾纤维化的形成是必需的。本文对TGF-β1/Smad通路对肾纤维化的机制以及中药对其干预进行综述,为肾疾病的治疗提供新的靶点。
简介:摘要目的研究白细胞衍生趋化因子2(leukocyte cell-derived chemotaxin 2,LECT2)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)诊断中的价值,探讨其对BA肝纤维化的影响。方法选取2018年1月至2019年1月天津市儿童医院普外科手术患儿20例,其中,男4例,女16例,留取患儿术中组织样本。BA患儿18例,先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)患儿2例。将BA患儿的组织样本作为BA组织组,CBD患儿的组织样本作为CBD组织组。两组手术组织样本通过免疫组织化学染色检测LECT2、CD31在肝脏中的表达程度。根据本研究血液样本纳入标准,选取2018年6月至2019年1月天津市儿童医院普外科门诊首诊的黄疸患儿及门诊检查的婴儿共31例,其中,男18例,女13例。经胆管造影确诊为BA的患儿有17例,作为BA组,非BA的黄疸患儿7例,作为非BA组;体检肝功能正常且无感染性疾病的婴儿7例作为对照组。3组中所有患儿均留取3 ml新鲜外周血液,通过ELISA法评估血清LECT2的水平。结果肝组织免疫组织化学检测结果:①与CBD组织组相比,BA组织组肝组织中LECT2的表达明显增高(0.173±0.045比0.280±0.053,t=2.761,P=0.013);BA组织组汇管区微血管密度也明显高于CBD组织组(5.400±1.697比28.811±8.972,t=3.599,P=0.013),差异均具有统计学意义;②LECT2的表达水平与肝纤维化程度呈正相关(rs=0.834,P<0.001),且与汇管区新生血管数量呈明显的正相关(r=0.686,P=0.001)。血清检测结果:BA组、非BA组及对照组3组相比,BA组患儿血清中LECT2明显上调(0.035 μg/ml比0.022±0.002 μg/ml比0.021 μg/ml,P=0.001),差异具有统计学意义。结论BA肝组织LECT2表达量随着汇管区血管增生程度的加重而增加,进而促进肝纤维化进程,血清学检查结果提示LECT2对BA的诊断具有一定价值。