简介：目的：对炎症细胞因子TNF-α及IFN-γ刺激下，人NOX1基因的表达调控进行初步分析。方法：将NOX1基因5′-端上游序列连接到无启动子的PGL3-BASIC质粒，构建了PGL3-BASIC／NOX1报告质粒。PGL3-BASIC／NOX1质粒转染A549细胞，用TNF-α、IFN-γ刺激12h，双荧光素酶报告基因系统检测基因表达情况。结果：克隆的NOX1片段具有较强的启动子活性，在TNF-α和IFN-γ共同刺激下，转染报告基因的A549细胞萤光素酶活性与对照相比有明显的增高（约4．3倍）。分析显示NOX1基因5′端上游序列片段含有NF-KB结合位点，提示细胞因子刺激的荧光素酶表达增强可能与NF-KB位点激活相关。结论：NOX1基因表达水平明显受到炎症细胞因子的调控，提示该基因可能参与机体免疫防御（特别是上皮细胞免疫防御），值得进行深入研究。

简介：目的：构建含解耦联蛋白2（UCP2）-3’非翻译区（UTR）序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体．探讨微小RNA（miR）-15b对UCP2基因表达的调控作用。方法：应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因，分别将预测靶基因UCP2的3’UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体DsiCHECK-2骨架中，构建UCP2野生型和突变型质粒。并采用测序方法鉴定DsiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功。将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染。通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用。结果：测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后，UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降．下调31％（P=0．003），过表达miR-15b抑制剂后，UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加，上调46％（P=0．01）。而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响（P〉0．05）。结论：UCP2是miR-15b直接作用的靶基因，且miR-15b结合于UCP2基因3’UTR区域．转录后水平对UCP2有直接的抑制作用。

简介：摘要本实验通过设计AQP-1启动子引物，提取乳腺癌细胞的基因组，利用PCR技术扩增出AQP-1基因的启动子序列，通过酶切、连接到荧光素酶报告基因载体--pGL-3basic上，通过荧光素酶活性检测（Luciferase活性分析）分析AQP-1启动子的活性。

简介：

简介：目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc＋亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL（fluc）SN在脂质体介导下＂乒乓＂转染GP＋E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP＋E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL（fluc）SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。

简介：目的：构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法：利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin（100μg/mL）抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3＇-AOX/5＇-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果：以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论：成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。

简介：由邰港科技研发成功的TK-1绿萤光基因鱼，这种全身会发绿色萤光的基因鱼，就是利用显微注射的方式把外来的绿萤光基因植入到野生种的青口鱼之胚胎内，经长时间培养、筛选所得的基因转殖鱼。TK-1绿萤光基因鱼不止在外表会发绿色萤光，其实其全身组织都会，甚至于产下的卵、胚胎、稚鱼及仔鱼全身也都有绿色萤光出现。又由于所发出来的绿色萤光相当强，

简介：目的：构建NOx4荧光素酶报告基因质粒载体，探讨NOX4基因表达调控机制。方法：以细胞基因组DNA为模板作，采用PCR扩增NOX4基因上游调控序列（533bp），插入质粒DGL3-basic载体，构建重组质粒pGL3-NOX4，重组质粒经酶切和测序鉴定。将pGL3-NOX4转染A549细胞，通过细胞因子刺激观察报告基因表达水平。结果：酶切及测序证实NOX4报告基因质粒构建成功。转染报告基因的A549细胞以细胞因子刺激，结果显示NOx4表达增强。结论：成功构建了NOX4荧光素酶报告基因质粒载体，为进一步研究NOX4基因的表达规律及生理功能奠定了基础。

简介：摘要目的建立检测聚乙二醇化胰高血糖素样肽1类似物(polyethylene glycolylated glucagon-like peptide-1 analogue，PEG-GLP-1a)生物活性的报告基因法，并对该方法进行验证。方法将人胰高血糖素样肽1受体表达载体和分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase, SEAP)报告基因载体瞬时共转染HEK293T细胞，培养后加入PEG-GLP-1a刺激细胞分泌SEAP，使用SEAP报告基因检测试剂盒进行测定，并验证其专属性、准确性、精密度、稳定性等指标。结果人胰高血糖素样肽1受体和SEAP双载体瞬时共转染的HEK293T细胞对PEG-GLP-1a具有强反应性。使用该方法测定PEG-GLP-1a具有良好的专属性。加标回收率为97.6%～102.2%，准确性较好。不同测定日期的日内半数效应浓度的变异系数均不超过10.22%，不同测定日期的日间半数效应浓度的变异系数均不超过13.02%。结论报告基因法可以用于PEG-GLP-1a的生物活性检测。

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简介：无

简介：受体报告基因实验具有快速、经济、灵敏、方便等诸多优势，在高通量筛选类或抗雌雄激素等通过核受体起作用的环境内分泌干扰物方面得到了广泛的应用。环境中的维甲酸和维甲酸X受体干扰物如有机锡等有着类似的作用机制，研究者也开始采用受体报告基因实验的厅法对该类污染物进行筛选与监测。本文综述了受体报告基因实验的技术方法，包括报告基因和宿主细胞的选择，并介绍了该方法在人工合成的维甲酸和维甲酸X受体干扰物筛选以及环境样品中该类污染监测中的应用。综述总结了应用受体报告基因实验检测环境内分泌干扰物研究中的不足并对该方法的未来发展进行了展望，希望为该方法在环境监测和评估中的应用提供新的思路。

简介：参加交流的精彩片断在我细长的瓜子脸上,有一对浓浓的眉毛,好似蒙古勇士的弯刀,下面长着一双乌黑明亮的眼睛,像两颗水灵灵的大葡萄,鹰钩鼻是我最突出的特点,我的那对大耳朵与弥勒佛的非常像,加上特爱笑,大家都叫“小弥勒佛”。

简介：

简介：参加交流的精彩片断:朝阳升起来了,把秋日的天空照得异常明亮。野花装点的山坡,在阳光照射下,显得更加绚丽多姿。风吹动着枫树的树冠,沙沙作响。一片枫叶脱离了枝头,随风悠悠荡荡地飘啊,飘啊,渐渐地落地,真像仙女下凡!白色的小野菊,从草堆里探出头来,还有小朵的黄花在凉爽的

简介：原花青素是黑果枸杞中一类重要的植化产物，但其生物合成机制仍不清楚。本研究利用黑果枸杞EST数据库，克隆了无色花色素还原酶基因（LrLAR）和花青素还原酶基因（LrANR）。PCR结果表明，LrLAR和LrANR分别由333个氨基酸残基、338个氨基酸残基组成的蛋白编码。进化分析表明，相应蛋白LrLAR、LrANR分别聚类于L4R和ANR族。实时定量PCR结果表明，从果实未成熟时期到变色期，LrLAR、LrANR的表达量均急剧上升，但在随后的发育时期中逐渐下降；与在果实中相比，在嫩叶、成熟叶、茎、根中，两基因的表达量极低。植化分析发现，果实中总原花青素含量高于嫩叶、成熟叶、茎、根中的含量，并且在果实成熟过程中呈现先增加后基本趋于稳定的趋势。本研究将为揭示黑果枸杞原花青素生物合成机制及促进其工程改良奠定基础。

简介：目的探讨腺病毒载体介导转铁蛋白受体报告基因（TFRC）转染人结直肠癌Lovo细胞的最佳感染复数（MOI）、目标基因表达情况及体外MR成像情况。方法采用介导转铁蛋白受体报告基因的腺病毒（Ad-TFRC）载体以5、10、50、100的MOI转染Lovo细胞,以实时定量PCR检测相应mRNA表达。以浓度不一的转铁蛋白（Tf）-超微超顺磁性氧化铁（USPIO）探针转染细胞后,经普鲁士蓝染色确定最佳浓度,并以台盼蓝染色评价细胞活力。采用7.0TMR以T2、T2map及T2~＊map序列对目标细胞成像,分析信号强度差异。结果Ad-TFRC成功转染Lovo细胞,最佳MOI值为50,感染效率〉90%;实时定量PCR检测显示Ad-TFRC转染Lovo细胞中TFRC蛋白表达量较空白对照Lovo细胞增多（P〈0.01）;普鲁士蓝染色结果示探针铁浓度为1.5μg/ml时最佳,Lovo细胞内可见大量蓝染铁颗粒;探针标记的Lovo细胞及空白对照Lovo细胞盼蓝染色拒染率分别为（93.80±1.60）%和（95.10±2.30）%,差异无统计学意义（P〉0.05）;体外MRT2W、T2map及T2~＊map成像显示,与空白对照Lovo细胞比较,探针标记的Lovo细胞信号强度减弱（P〈0.05）。结论腺病毒载体可在Lovo细胞中高效表达转铁蛋白受体报告基因,磁化标记后可成功实现Lovo细胞的体外7.0TMR显像。

简介：CAD病人ACE基因II型、ID型和DD型频率分别为28%(22/79)、29%(23/79)和43%(34/79),CAD患者中DD基因型与D等位基因频率均显著高于对照组(P＜0.05),应用聚合酶链反应测定了79例冠心病(CAD)及68名正常人ACE基因第16内含子I/D多态性

简介：摘要RAS在血压及心血管稳态调节中占有极其重要的地位，它的过度激活与冠心病、高血压、心肌病等疾病的发生、发展相关。血管紧张素转化酶（ACE）和血管紧张素原（AGT）是其中的两个关键成分。其基因多态性对心血管疾病的影响近年来研究较多。现将这方面的研究作一综述。